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英文簡稱
規(guī)格
貨號
P19:P19
1×106
P-X1093
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：P-19；P19 ；小鼠畸胎瘤細(xì)胞
種屬來源：小鼠
年齡性別：雄性
組織來源：胚胎；畸胎癌
生長特性：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景簡介：P19細(xì)胞是加拿大渥太華大學(xué)的Mc Burney 等在1982 年從雄性C3H/He小鼠畸胎瘤中分離得到的 , 是一種能夠在體外培養(yǎng)的多能干細(xì)胞，P19 細(xì)胞團(tuán)經(jīng)RA 誘導(dǎo)可分化成神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞和纖維母細(xì)胞；而經(jīng)二甲基亞砜(DM SO ) 誘導(dǎo)則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細(xì)胞；在P19細(xì)胞向神經(jīng)元分化的過程中，神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)模式基本模擬了正常小鼠神經(jīng)發(fā)育過程， 因此， P19 目前被用作一個研究神經(jīng)發(fā)育的體外模型。P19細(xì)胞在含有0.1mMβ-巰基乙醇的培養(yǎng)基：中克隆的效率高。細(xì)胞具有多能性：在500nM維生素A酸誘導(dǎo)下，細(xì)胞可以分化成神經(jīng)樣和神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞；在0.5%-1.0%二甲亞砜(DMSO)存在下，細(xì)胞分化形成心臟和骨骼肌樣基質(zhì)，但不形成神經(jīng)樣或神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞。在DMSO和維生素A酸同時存在時，細(xì)胞的分化與只有維生素A酸一樣。
生物等級：1
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無
基因表達(dá)情況：
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-1825 DSMZ; ACC-316 ECACC; 95102107
培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10% FBS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存
倍增時間：~48-72小時
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子HOXD9抗體 |
NDUFB11蛋白抗體 |
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HOXD9 |
轉(zhuǎn)化生長因子β4抗體TGF β4 Anti-Lefty/TGF beta 4 |
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細(xì)胞分裂周期蛋白5抗體 |
GANP |
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APC5 |
中心相關(guān)核蛋白MCM3抗體 |
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絲氨酸蛋白酶8抗體 Anti-PRSS8 |
NDUFB11 |
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固生蛋白3抗體 Anti-ODZ3/Teneurin 3 |
CK3 |
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尿素轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體 Anti-SLC14A1/RACH1 |
NSUN3蛋白抗體 |
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細(xì)胞角蛋白3抗體 |
NSUN3 |
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大鼠別孕烯醇酮/3α,5α-四氫孕酮(AP/3α,5α-THP)elisa分析檢測試劑盒 |
血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體 Anti-VEGFR2/FLK1 |
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AP/3α-5α-THP ELISA Kit |
磷酸化谷氨酸受體1抗體 Anti-Phospho-NMDAR1(Ser897) |
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人敏感性脂肪酶(HSL)elisa分析檢測試劑盒 |
c-Myc應(yīng)答蛋白抗體 Anti-RCL/c Myc responsive |
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HSLELISAKit |
轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白1抗體 Anti-TTI1 |
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綿羊5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)elisa檢測試劑盒 |
小鼠V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因源物(FOS)elisa檢測試劑盒 |
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細(xì)胞CASPASE-8蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 |
P19小鼠畸胎瘤細(xì)胞高純度質(zhì)粒小提試劑盒 50次 |
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Kelch樣蛋白2抗體 |
軟骨中間層蛋白CILP2抗體 |
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KLHL2 |
CILP2 |