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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
SK-MEL-28:SKMEL28
1×106
P-X957
產(chǎn)品詳情：
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 多邊形
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）
生長(zhǎng)培養(yǎng)基:MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:8
推薦換液頻率 2-3天/次
參考資料(來(lái)源文獻(xiàn))
年齡（性別） 男性；51歲
組織來(lái)源 皮膚
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 皮膚黑色素瘤
生物等級(jí) BSL-1
倍增時(shí)間 27 hours (PubMed=7718330); 72 hours (PubMed=12479222); 26.9 hours (PubMed=20406486); 35.1 hours (NCI-DTP).
致瘤性 Yes; Yes, in nude mice; forms malignant melanoma (large round cell type)
保藏機(jī)構(gòu) AddexBio; C0020001/66 ATCC; HTB-72 BCRJ; 0289 CLS; 300337 ICLC; HTL99010 NCI-DTP; SK-MEL-28 RCB; RCB1930 - Discontinued TKG; TKG 0333
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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魚白三烯B4(LTB4)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
鯊魚睪酮(T)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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LT-B4 ELISA Kit |
體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶CYP2D6（AMMC）活性 |
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人丙二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
IL-32ELISAKit |
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HumanmalonylcoenzymeAELISAKit |
人白介素32(IL-32)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)elisa檢測(cè)試劑盒 |
T ELISA Kit |
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大鼠透明質(zhì)酸酶1(HYAL1)elisa檢測(cè)試劑盒 |
NUP54 |
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體液銅離子濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框78抗體 |
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NUP54抗體 |
C9orf78 |
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APC標(biāo)記的小鼠抗牛IgG H&L |
三葉肽因子2抗體 Anti-TFF2 |
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Mouse Anti-Bovine IgG H&L / APC |
尿激酶型纖溶酶原激活因子抗體 Anti-PLAU/UPA/Urokinase |
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溶質(zhì)載體家族24成員4抗體 |
親環(huán)素相關(guān)蛋白1抗體 Anti-PPIL1 |
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SLC24A4 |
DNA聚合酶δ相互作用蛋白3抗體 Anti-SKAR |
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人CC趨化因子受體5(CCR5)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
小鼠球蛋白A(IgA)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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HumanCCR5ELISAKit |
SK-MEL-28人皮膚黑色素瘤細(xì)胞IgAELISAKit |
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大鼠Smad7 elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
人胱天蛋白酶-5(CASP5)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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Smad7 ELISA Kit |
HumanCASP5ELISAKit |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。