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英文簡稱
規(guī)格
貨號
MRC-5(有限細(xì)胞系):MRC5有限細(xì)胞系
1×106
P-X863
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱:MRC-5;人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC5; MRC 5; MRCV; MRC-V; Medical Research Council cell strain-5
種屬來源:人
年齡性別:男;14周齡
組織來源:肺
生長特性:貼壁生長
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
背景簡介:MRC-5細(xì)胞系來自14周齡男性胎兒的正常肺組織,該細(xì)胞老化前能傳代42到46次群體倍增。它是正常二倍體細(xì)胞系,46,XY核型。模式染色體數(shù)為46,概率為70%。
生物等級:1
細(xì)胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測:無
基因表達(dá)情況:
保藏機(jī)構(gòu):ATCC; CCL-171 ECACC; 97112601
培養(yǎng)基:MEM+10%FBS+PS
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
倍增時(shí)間:~36-96 hours
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12;D13S317:11,14;D16S539:9,11;D18S51:15,21;D19S433:14,15;D21S11:31.2;D2S1338:20;D3S1358:15,17;D5S818:11,12;D7S820:10,11;D8S1179:13;FGA:21,23;TH01:8;TPOX:8;vWA:15;
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品:
LIN54蛋白抗體 |
蛋白酶抑制劑14抗體 |
LIN54 |
髓系細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體 Anti-TREML2/TLT2 |
BIVM蛋白抗體 |
Hsp104 |
BIVM |
熱休克蛋白104抗體 |
NADPH氧化酶活化蛋白p47抗體 Anti-p47-phox |
PI14 |
腸道71型/手足口病抗體 Anti-EV71 polyprotein VP1 |
Rabbit Anti-Guinea Pig IgG H&L / PE |
源轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白Sin3A抗體 Anti-mSin3A |
磷酸化蛋白激酶底物相關(guān)蛋白抗體 |
PE標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG H&L |
phospho-HEF1 (Ser369) |
大鼠12羥二十烷四烯酸(12-HETE)elisa分析檢測試劑盒 |
鋅指蛋白231抗體 Anti-ZNF231 |
12-HETE ELISA Kit |
氯離子通道蛋白27抗體 Anti-NCC27/CLIC1 |
人封閉蛋白4(CLDN4)elisa分析檢測試劑盒 |
Ras樣蛋白A抗體 Anti-RALA |
HumanCLDN4ELISAKit |
磷酸化認(rèn)知缺陷突觸相關(guān)蛋白SynGAP抗體 Anti-phospho-SynGAP (Ser836) |
人胰島素抗體(Anti-Ins)elisa檢測試劑盒 |
魚17α,20β羥基孕酮(17α,20βOH-PROG)elisa分析檢測試劑盒 |
組織人體鼻病毒(rhinovirus))定性檢測試劑盒 |
MRC-5(有限細(xì)胞系)人胚肺成纖維細(xì)胞大鼠神經(jīng)肽Nesfatin-1 elisa檢測試劑盒 |
MFSD7蛋白抗體 |
唐氏綜合征臨界區(qū)域蛋白4抗體 |
MFSD7 |
DSCR4 |