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細(xì)胞接收后的處理：
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
HULEC-5a
1×106
P-X10815
產(chǎn)品詳情：
生長特性
貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
上皮細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基 MCDB131＋10ng/ml EGF＋1μg/ml Hydrocortisone＋10mM L-glutamine＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
年齡（性別）
新生
組織來源
肺
細(xì)胞類型
轉(zhuǎn)化細(xì)胞系
生物等級 2
保藏機構(gòu) ATCC; CRL-3244
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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鴿子胃動素(MTL)elisa分析檢測試劑盒 |
睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 CNTF |
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MTL ELISA Kit |
突觸核膜蛋白1抗體 Nesprin 1 |
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人單純皰疹病毒抗原-1(HSV-Ag1)elisa分析檢測試劑盒 |
AF594標(biāo)記的程序性死亡配體1抗體 PD-L1, Alexa Flour 594 conjugated |
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HSV-Ag1ELISAKit |
8號染色體開放閱讀框72抗體 C8orf72 |
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微管蛋白β5抗體 TUBB5 |
巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體 Macrophage Inflammatory Protein 1 gamma |
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RSPH10B蛋白抗體 RSPH10B |
脯氨酰羧肽酶抗體 PRCP |
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SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體 SHC1 |
GPR172A蛋白抗體 GPR172A |
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尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A9 UGT1A9 |
G蛋白偶聯(lián)受體171抗體 GPR171 |
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?細(xì)胞COLLAGEN III蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 |
乙?；?span>P53(Lys382)單克隆抗體 p53 (Acetyl K382) |
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大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)elisa檢測試劑盒 |
熒光素酶單克隆抗體 Firefly Luciferase |
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人體細(xì)胞N-乙酰轉(zhuǎn)移酶1（NAT1）活性比色法定量檢測試劑盒 |
二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白1抗體 CRMP1 |
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小鼠B細(xì)胞瘤因子2(Bcl-2)elisa檢測試劑盒 |
肥大細(xì)胞類胰蛋白酶抗體 Mast Cell Tryptase |
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犬2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)elisa檢測試劑盒 |
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細(xì)胞酶（glutaminase）活性比色法（405）定量檢測試劑盒 |
HULEC-5a人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)elisa檢測試劑盒 |
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CCK-8細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒1000T |
蔗糖含量測試盒 |
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小鼠催乳素(PRL)elisa分析檢測試劑盒 |
TEM電鏡細(xì)胞化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP直接檢測試劑盒（含AP一抗） |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。