常見樣本處理方法：

1、血清（漿）樣品：直接檢測。

2、細(xì)胞或組織樣品的制備：培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量

（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議 500萬細(xì)胞加入 1mL提取液） ，超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲 3s，間隔10s，重復(fù)30 次）8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，

加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

特點：

       1、優(yōu)化設(shè)計的實驗方案，1小時即可完成

       2、靈敏度高，操作便捷

       3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑 

實驗通用規(guī)則:

1、將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

2、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

3、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

4、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

5、實驗時，要使底物避光保存。

6、洗板時，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機(jī)時，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。

7、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

8、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。

10、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。

試劑使用須知：

（1）請參照相關(guān)法規(guī)、文獻(xiàn)、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進(jìn)行**操作。

（2）通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，更加注意其他保管和管理。

（3）萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。對于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。

（4）購買后，請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項；做好預(yù)防顛倒，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項，做好必要的**對策；對沒有標(biāo)明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進(jìn)行操作；必須帶好防護(hù)用具，小心翼翼進(jìn)行操作。

操作流程：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit

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