別    名   cGMP dependent protein kinase anchoring protein of 42 kDa; cGMP-dependent protein kinase-anchoring protein of 42 kDa; G kinase anchoring protein 1; G kinase-anchoring protein 1; gkap1; GKAP1_HUMAN; GKAP42.
英文名稱  Anti-GKAP1

中文名稱  G激酶錨定蛋白1抗體

濃    度  1mg/1ml

濃    度  1mg/1ml

規(guī)  格  1mg/1ml    

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應  Human, Mouse, Rat, Dog, Horse

產(chǎn)品類型  一抗

研究領域  細胞生物 信號轉導 激酶和磷酸酶 

蛋白分子量 predicted molecular weight: 42kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human GKAP1

亞    型  IgG 

本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。

抗體的熒光標記法：

（一）基本原理

賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價結合。與FITC結合的抗體可用為特異性的探針,以測定細胞相應抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。

（二）儀器和試劑

1.待偶聯(lián)抗體；

2.碳酸氫鈉緩沖液；

3.疊氮鈉；

4.庵氰酸熒光素；

5.電磁攪拌器。

抗體反應特點：

1.高度特異性，特異性是抗原抗體反應的主要特征，特定抗原決定簇只與特定抗體結合；

2.可逆性:抗原與抗體結合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態(tài)平衡, 其反應式為：Ag+AbAg·Ab；

3.適當濃度和比例；

4.敏感性:在測定血清中某一物質的含量時，化學比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應測定法的敏感度約為5~10μg/ml，定中凝膠擴散法的敏感度與酶反應法相仿。

抗體反應的因素：

1.電解質 ：抗原抗體特異結合后，膠體粒便可發(fā)生脫水作用，此時易受電解質影響，如有適當濃度的電解質存在就會使它們失去部分負電荷而相互凝聚，于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。

2.酸堿度:合適的pH為6-8。

3.溫度:37℃通常是抗原體反應溫度。

實驗步驟：

1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水

2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復，在此步驟后進行）。

3、3%雙氧水去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。

4、滴加試劑A（藍色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

5、滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。

6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）

12、自來水充分沖洗。

13、如果需要，可進行復染，脫水，透明。

14、選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?/span>

抗體分子標記技術：

（一）原理

當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所**的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。

（二）準備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應損傷蛋白質，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。

解脂亞羅酵母 Yarrowia lipolytica中慢生華癸根瘤 Mesorhizobium huakuii

小鼠肝動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基人前列腺上皮細胞完全培養(yǎng)基

大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicumECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細胞)

鼠李糖桿 Lactobacillus rhamnosusHUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞系

大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum異常漢遜酵母 Hansenula anomala

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae費氏中華根瘤 Sinorhizobium fredii

丹參酮IIAU-2 OS, 人骨肉瘤細胞

嗜熱脂肪地芽孢桿 Geobacillus stearothermophilus蘇云金芽胞桿日本亞種 Bacillus thuringiensis subsp. japanensis

SF763(人腦瘤細胞)SW 780(人膀胱移行細胞)

無花果曲霉 Aspergillus ficuumMS1(小鼠胰島內(nèi)皮細胞)

COLO全細胞裂解液釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

黑綠木霉刺芹側耳 Pleurotus eryngii

CTLL-2(小鼠T細胞)根土壤桿 Agrobacterium tumefaciens

G激酶錨定蛋白1抗體飛龍掌血根皮  英文名稱：Toddalia asiatica Redroot bark   保存：-20℃   規(guī)格：1g

天花粉  英文名稱：Trichosanthin   保存：-20℃   規(guī)格：1g

鐵筷子  英文名稱：Iron chopsticks   保存：-20℃   規(guī)格：2g

重樓(云南重樓)  英文名稱：Paris (Yunnan Paris)   保存：-20℃   規(guī)格：1g

明黨參  英文名稱：Changium smyrnioides   保存：-20℃   規(guī)格：1g

蘇木  英文名稱：Hematoxylin   保存：-20℃   規(guī)格：1g

委陵菜  英文名稱：Potentilla chinensis   保存：-20℃   規(guī)格：1g

黑豆  英文名稱：Black beans   保存：-20℃   規(guī)格：5g

伊貝母(新疆貝母)  英文名稱：Siberian Fritillary (Fritillaria Xinjiang)   保存：-20℃   規(guī)格：5g

人參皂苷Ro  英文名稱：Ginsenoside Ro   保存：-20℃   規(guī)格：20mg

千金子甾醇（千金子素L1)  英文名稱：Euphorbiasteroid (Leptochloa chinensis L1)   保存：-20℃   規(guī)格：20mg

蓮心鹼高氯酸鹽  英文名稱：Liensinine perchlorate   保存：-20℃   規(guī)格：20mg

抗體的種類：

抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的，體液性抗體由B淋細胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學結構和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對疫球蛋白G、A、M、E了解較多，對D的功能了解較少。

（1） IgG：是血清中濃度大的一類球蛋白，約占疫球蛋白含量的70～80%，50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后，其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體，分子量16萬～18萬，可以通過兔的胎盤，但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學反應中，參與沉淀反應、凝集反應、補體結合反應和中和反應。

（2） IgM：由5個球蛋白單位組成的五聚體，在血清中的含量僅次于IgG，分子量90萬，是體內(nèi)大的球蛋白?？乖醮未碳C體后，IgM出現(xiàn)早,在血清中的含量僅次于IgG，主要分布在血管內(nèi)，可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體，免作用很強，是IgG的100倍，但由于含量僅為IgG的1/10，且持續(xù)時間短，所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學反應中，參與凝集反應和補體結合反應。

（3） IgA：有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中，分子量約為17萬，亦稱為血清型IgA，有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中，如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液，以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱為分泌型IgA，由存在于粘膜和組織上的漿細胞產(chǎn)生，分子量40萬，含量較單體高6～８倍，是粘膜的重要防御因素，可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。

（4） IgE：是一種特殊的糖蛋白，為單位體結構，分子量19萬，由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結中的漿細胞所形成，在血清中含量甚微，是一種致敏抗體，容易吸附在**表面，當與相應抗原結合所引起過敏反應。在機體抵抗**和病毒的感染中幾乎無作用。