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別 名 TFIIB; General transcription factor IIB; General transcription factor TFIIB; GTF2B; RNA polymerase II transcription factor IIB; S300 II; S300-II; TF IIB; TF2B; TF2B_HUMAN; Transcription initiation factor IIB.
英文名稱 Anti-GTF2B
中文名稱 通用轉錄因子GTF2B抗體
濃 度 1mg/1ml
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 1mg/1ml
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應 Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Rabbit
產品類型 一抗
研究領域 細胞生物 **學 轉錄調節(jié)因子 表觀遺傳學
蛋白分子量 predicted molecular weight: 35kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human GTF2B corresponding to amino acids 131-180.
亞 型 IgG
本公司產品僅用于科研實驗。
抗體的熒光標記法:
(一)基本原理
賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價結合。與FITC結合的抗體可用為特異性的探針,以測定細胞相應抗原的存在。FITC具有很高的量子產量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯物的穩(wěn)定性很好。
(二)儀器和試劑
1.待偶聯抗體;
2.碳酸氫鈉緩沖液;
3.疊氮鈉;
4.庵氰酸熒光素;
5.電磁攪拌器。
抗體反應特點:
1.高度特異性,特異性是抗原抗體反應的主要特征,特定抗原決定簇只與特定抗體結合;
2.可逆性:抗原與抗體結合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態(tài)平衡, 其反應式為:Ag+AbAg·Ab;
3.適當濃度和比例;
4.敏感性:在測定血清中某一物質的含量時,化學比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應測定法的敏感度約為5~10μg/ml,定中凝膠擴散法的敏感度與酶反應法相仿。
抗體反應的因素:
1.電解質 :抗原抗體特異結合后,膠體粒便可發(fā)生脫水作用,此時易受電解質影響,如有適當濃度的電解質存在就會使它們失去部分負電荷而相互凝聚,于是出現明顯的凝集或沉淀現象。
2.酸堿度:合適的pH為6-8。
3.溫度:37℃通常是抗原體反應溫度。
實驗步驟:
1、石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗,pbs 浸泡5 分鐘(如需采用抗原修復,在此步驟后進行)。
3、3%雙氧水去離子水(無色液體)孵育15-20 分鐘,以消除內源性過氧物酶活性。
4、滴加試劑A(藍色液體)室溫孵育15-20 分鐘,傾去,勿洗。
5、滴加適當比例稀釋的一抗,37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。
6、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B(黃色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色(DAB 或AEC)
12、自來水充分沖洗。
13、如果需要,可進行復染,脫水,透明。
14、選擇適當的封片劑封片。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所**的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
PC-12(高分化),PC12,大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞株(高分化)Hepa 1-6(小鼠肝細胞)
銅綠假單胞 Pseudomonas aeruginosa米根霉 Rhizopus oryzae
苜蓿中華根瘤IEC-6/大鼠小腸上皮細胞
大鼠胰島細胞完全培養(yǎng)基大鼠骨髓基質細胞完全培養(yǎng)基
阿舒假囊酵母 Crebrothecium ashbyii屎腸球 Enterococcus faecium
豌豆根瘤 Rhizobium leguminosarum皺褶假絲酵母 Candida rugosa
蘇云金芽胞桿庫爾斯塔克亞種 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki
臺灣根霉 Rhizopus formosensis鞘氨醇桿屬 Sphingobacterium sp.
黑木耳 Auricularia auricula鼠李糖桿 Lactobacillus rhamnosus
大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum293E(人胚腎細胞(EBNA1基因修飾))
WPMY-1(人正常前列腺基質永生化細胞)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
小單孢 Micromonospora sp.地衣芽孢桿 Bacillus licheniformis
中慢生華癸根瘤 Mesorhizobium huakuii
通用轉錄因子GTF2B抗體野黃芩苷 英文名稱:Scutellarin 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支
對傘花烴、異丙基對甲苯;4-異丙基甲苯 英文名稱:P-cymene, isopropyl toluene; 4- isopropyl toluene 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支
D(+)-半乳糖、D-吡喃葡萄糖;D-( 英文名稱:D (+) - galactose and glucose D- (D- pyran; 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支
異黃芪皂苷II 英文名稱:Different astragalus saponin II 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 10mg/支
槐角苷 英文名稱:Sophoricoside 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支
L-丙氨酸 英文名稱:L- alanine 保存:-20℃ 規(guī)格:100mg
利巴韋林 英文名稱:Leigh Bhave Lin 保存:-20℃ 規(guī)格:約25mg/支
(左)氧氟沙星雜質E 英文名稱:(left) ofloxacin impurity E 保存:-20℃ 規(guī)格:50mg
卡那B 英文名稱:Kanamycin B 保存:-20℃ 規(guī)格:50mg
鹽酸四環(huán)素 英文名稱:Tetracycline hydrochloride 保存:-20℃ 規(guī)格:200mg
頭孢唑啉 英文名稱:Cefazolin 保存:-20℃ 規(guī)格:200mg
麥迪 英文名稱:Maddie mycin 保存:-20℃ 規(guī)格:200mg
抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產生的,體液性抗體由B淋細胞系產生。根據其化學結構和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度大的一類球蛋白,約占疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后,其產生時間僅次于IgM。在抗體介導的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學反應中,參與沉淀反應、凝集反應、補體結合反應和中和反應。
(2) IgM:由5個球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內大的球蛋白??乖醮未碳C體后,IgM出現早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內,可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免作用很強,是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時間短,所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學反應中,參與凝集反應和補體結合反應。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細胞產生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結構,分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結中的漿細胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在**表面,當與相應抗原結合所引起過敏反應。在機體抵抗**和病毒的感染中幾乎無作用。