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抗體反應(yīng)特點:
1.高度特異性,特異性是抗原抗體反應(yīng)的主要特征,特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合;
2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為:Ag+AbAg·Ab;
3.適當濃度和比例;
4.敏感性:在測定血清中某一物質(zhì)的含量時,化學比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml,定中凝膠擴散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。
抗體反應(yīng)的因素:
1.電解質(zhì) :抗原抗體特異結(jié)合后,膠體粒便可發(fā)生脫水作用,此時易受電解質(zhì)影響,如有適當濃度的電解質(zhì)存在就會使它們失去部分負電荷而相互凝聚,于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。
2.酸堿度:合適的pH為6-8。
3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)溫度。
別 名 c-Cbl (phospho-Tyr700); C CBL; Cas Br M (murine) ecotropic retroviral transforming sequence; Cas-Br-M (murine) ecotropic retroviral transforming sequence; Casitas B lineage lymphoma proto oncogene; Casitas B-lineage lymphoma proto-oncogene; CBL 2; cbl; CBL_HUMAN; CBL2; E3 ubiquitin protein ligase CBL; E3 ubiquitin-protein ligase CBL; Oncogene CBL2; Proto oncogene c CBL; Proto-oncogene c-CBL; RGD1561386; RING finger protein 55; RNF55; Signal transduction protein CBL.
英文名稱 Anti-phospho-CCBL(Tyr700)
中文名稱 磷酸化原癌基因CBL2抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse
產(chǎn)品類型 一抗 磷酸化抗體
研究領(lǐng)域 腫瘤 **學 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 b-**細胞
蛋白分子量 predicted molecular weight: 100kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human C CBL around the phosphorylation site of Tyr700
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
亞 型 IgG
本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
抗體的熒光標記法:
(一)基本原理
賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測定細胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。
(二)儀器和試劑
1.待偶聯(lián)抗體;
2.碳酸氫鈉緩沖液;
3.疊氮鈉;
4.庵氰酸熒光素;
5.電磁攪拌器。
實驗步驟:
1、石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗,pbs 浸泡5 分鐘(如需采用抗原修復(fù),在此步驟后進行)。
3、3%雙氧水去離子水(無色液體)孵育15-20 分鐘,以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。
4、滴加試劑A(藍色液體)室溫孵育15-20 分鐘,傾去,勿洗。
5、滴加適當比例稀釋的一抗,37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。
6、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B(黃色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色(DAB 或AEC)
12、自來水充分沖洗。
13、如果需要,可進行復(fù)染,脫水,透明。
14、選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?/span>
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所**的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋細胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度大的一類球蛋白,約占疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學反應(yīng)中,參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。
(2) IgM:由5個球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內(nèi)大的球蛋白??乖醮未碳C體后,IgM出現(xiàn)早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免作用很強,是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時間短,所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學反應(yīng)中,參與凝集反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細胞產(chǎn)生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結(jié)中的漿細胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在**表面,當與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過敏反應(yīng)。在機體抵抗**和病毒的感染中幾乎無作用。
萊姆IgG(Lyme-IgG)elisa檢測試劑盒英文名稱:Lyme-IgG ELISA Kit,英文縮寫:Lyme-IgG,產(chǎn)品別名:萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA檢測試劑盒,萊姆IgG(Lyme-IgG)檢測試劑盒產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月。
人抗小鼠抗體(HAMA)elisa檢測試劑盒英文名稱:HAMA ELISA Kit,英文縮寫:HAMA,產(chǎn)品別名:人抗小鼠抗體(HAMA)ELISA檢測試劑盒,人抗小鼠抗體(HAMA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月。
可溶性CD38(sCD38)elisa檢測試劑盒英文名稱:sCD38 ELISA Kit,英文縮寫:sCD38,產(chǎn)品別名:可溶性CD38(sCD38)ELISA檢測試劑盒,可溶性CD38(sCD38)檢測試劑盒產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月。
人抗卵巢抗體(AOAb)elisa檢測試劑盒英文名稱:AOAb ELISA Kit,英文縮寫:AOAb,產(chǎn)品別名:人抗卵巢抗體(AOAb)ELISA檢測試劑盒,人抗卵巢抗體(AOAb)檢測試劑盒產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月。
人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)elisa檢測試劑盒英文名稱:LC1 ELISA Kit,英文縮寫:LC1,產(chǎn)品別名:人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)ELISA檢測試劑盒,人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月。
巨噬炎性蛋白5(MIP-5)elisa檢測試劑盒英文名稱:MIP-5 ELISA Kit,英文縮寫:MIP-5,產(chǎn)品別名:巨噬炎性蛋白5(MIP-5)ELISA檢測試劑盒,巨噬炎性蛋白5(MIP-5)檢測試劑盒產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月。
核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)elisa檢測試劑盒英文名稱:AFA/snoRNP/U3RNP ELISA Kit,英文縮寫:AFA/snoRNP/U3RNP,產(chǎn)品別名:核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA檢測試劑盒,核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月。
棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶GODZ抗體
環(huán)指蛋白27抗體
半乳糖凝集素9抗體
腦糖原磷酸化酶抗體
神經(jīng)節(jié)肽抗體
顆粒酶B抗體
腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體(鋅指蛋白5)
HBeAg結(jié)合蛋白4/甘油激酶抗體
E3連接酶抑制素受體抗體
類狀瘤病毒31 E7抗體
A型禽流感病毒H1N1蛋白抗體
磷酸化原癌基因CBL2抗體四螨嗪(標準品)Strong acid cation exchange resin250G吸附樹脂
四螨嗪標準溶液(100μg/ml,u=4%)Potassium hexafluorophosphate,98%50G通用試劑
四螨嗪標準溶液(10μg/ml,u=6%)Potassium biphthalate,≥99.95%100G通用試劑
萎銹靈(標準品)Potassium stearate250G通用試劑
環(huán)己(Standard for GC,>99.0%(GC))Potassium citrate100G通用試劑
敵草索(標準品)Potassium benzoate,≥99.0%250G通用試劑
1氯辛(標準品)Potassium bitartrate,99%100G通用試劑
十二(標準品)Potassium tartrate dibasic hemihydrate...100G通用試劑
鉍標準溶液(100mg/L,基體: 5%HNO3)Potassium tetraoxalate dihydrate,≥99.5%50G通用試劑
銅標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)Potassium titanyl oxalate100G通用試劑
銅標準溶液(100μg/mL,基體:1%HNO3)Potassium binoxalate,99.99%100G通用試劑
鈷標準溶液(1000μg/ml)Potassium oxalate monohydrate,≥98.5%100G通用試劑
六價鉻標準溶液(1000μg/ml,溶劑:水)Potassium acetate,≥99.0%100G通用試劑
鉺標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)Potassium tellurite,99.5%25G通用試劑
金標準溶液(100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液)Potassium fluoroaluminate100G通用試劑