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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文名稱
A498:A498
產(chǎn)品形態(tài)
上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)
貨號(hào)
P-X646
產(chǎn)品分類
人細(xì)胞系
規(guī)格
1×106
包裝
株
來(lái)源
腎臟
用途
僅供科研研究使用
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：A-498 ；A498；人腎透明細(xì)胞癌
種屬來(lái)源：人
年齡性別：女；52歲
組織來(lái)源：腎臟
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介：A-498細(xì)胞系由Aaronson S建立，源自一位52歲患有腎癌的女性病人。
生物等級(jí)：1
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無(wú)
基因表達(dá)情況：
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-7908 ATCC; HTB-44 DSMZ; ACC-55； 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心
培養(yǎng)基：MEM+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
倍增時(shí)間：~60 hours
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：x,x；CSF1PO：11,12；D12S391：21,21；D13S317：12,12；D16S539：12,12；D18S51：17,17；D19S433：12,12；D21S11：28,32；D2S1338：26,26；D3S1358：15,15；D5S818：11,13；D6S1043：11,11；D7S820：10,11；D8S1179：13,15；FGA：18,20；Penta E：10,14；TH01：6,9.3；TPOX：8,11；vWA：18,18；
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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核仁蛋白12抗體 |
S100A1抗體 S100A1 |
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NOL12/NOP25 |
鉀離子通道亞家族T成員1抗體 KCNT1 |
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9號(hào)染色體開放閱讀框139抗體 |
銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 COMMD3 |
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C9orf139 |
糖磷脂酰肌醇抗體 GPI |
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接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體 CNTNAP4 |
SHISA6蛋白抗體 SHISA6 |
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3-磷酸甘油醛脫氫酶（內(nèi)參）抗體 GAPDH (Loading Control) |
防御素β-127/β-defensin 127抗體 DEFB127 |
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7號(hào)染色體開放閱讀框30抗體 C7orf30 |
陽(yáng)離子通道精子相關(guān)蛋白4抗體 CATSPER4 |
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發(fā)育多能性相關(guān)蛋白3抗體 Stella |
胰脂肪酶相關(guān)蛋白1抗體 PLRP1 |
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Rap1鳥苷酸酶活性分析試劑盒 |
腦蛋白239抗體 MPPED2 |
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小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
鳥氨酸氨甲?；€粒體抗體 OTC/Ornithine Carbamoyltransferase |
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大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)elisa檢測(cè)試劑盒 |
FITC標(biāo)記小鼠H-2D(D)單克隆抗體 mouse H-2Dd/FITC |
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CDK2蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 |
G蛋白激活內(nèi)向鉀通道1抗體 GIRK1/KCNJ3 |
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小鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)elisa檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞半胱-1（CASPASE-1）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠蛋白激酶G(PKG)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
A498人腎癌細(xì)胞人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子13(FGF-13)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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即用型TB培養(yǎng)基 5個(gè)/包 |
小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10(FGF10)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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Borrelia burgdorferi RFLP基因分析試劑盒 |
大鼠CD63分子(CD63)elisa檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。